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從儀器構(gòu)成來說,普通PCR儀主要由熱循環(huán)系統(tǒng)組成,熒光定量PCR儀和數(shù)字PCR儀除了熱循環(huán)系統(tǒng)外,還含有光學檢測系統(tǒng)以及配套的操作分析軟件。 溫控性能是PCR反應最重要的影響因素之一 由PCR原理也可看出,PCR反應是不斷升溫和降溫的過程。需要能在變性-退火-延伸這三個關(guān)鍵步驟進行溫度控制。溫度控制涉及溫度準確性、干式恒溫加熱器均一性、升降溫速率、溫度梯度等多個方面! 囟葴蚀_性是PCR儀的重要性能指標。如果儀器溫度準確性差,樣品槽的實際溫度不能達到設定溫度,那就無法獲得預期的擴增結(jié)果,即要么擴增不出來,要么產(chǎn)生非特異性擴增甚至是錯誤擴增! 囟染恍允谦@得穩(wěn)定擴增的保障。若PCR儀的溫度均一性差,在出現(xiàn)不同擴增結(jié)果時就無法判斷是樣品本身不同造成還是儀器性能不好所導致。 升降溫速率不僅直接影響PCR實驗用時,進而影響工作效率,還會影響擴增產(chǎn)物的特異性。升降溫速率越快,特異性越好。 PCR儀梯度溫度功能對于反應條件的優(yōu)化(尤其是退火溫度的優(yōu)化)有很大幫助。對于新開展的實驗,通過溫度梯度功能快速獲得最佳退火溫度! 悠凡鄄馁|(zhì)影響溫控性能 PCR儀樣品槽的材質(zhì),會影響上述這幾個溫控方面性能,F(xiàn)在大多數(shù)PCR儀采用的是鋁合金材質(zhì)樣品槽,高端PCR儀則采用熱導性能更好的銀質(zhì)樣品槽。 光學檢測系統(tǒng)對結(jié)果產(chǎn)生很大影響干式恒溫加熱器 對于熒光定量PCR儀來說,光學檢測系統(tǒng)的好壞對檢測結(jié)果會產(chǎn)生很大影響。光學檢測系統(tǒng)主要包含激發(fā)光源、檢測器、信號采集方式、檢測通道數(shù)量等方面! 〖ぐl(fā)光源需考慮光譜范圍和光強。雖然現(xiàn)在新一代產(chǎn)品的激發(fā)光源大多都是LED燈,但單色LED燈和復合光白色LED燈,在激發(fā)效果上還是各有優(yōu)劣。最好能利用各自的優(yōu)勢形成既寬又強的光照激發(fā)效果。